蛋白定量的方法有很多種，應(yīng)用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測(cè)法和Bradford蛋白定量檢測(cè)法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測(cè)方法而開(kāi)發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，蛋白與定量試劑經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的反應(yīng)（BCA法反應(yīng)為37℃、20-30min，Bradford法反應(yīng)一般為37℃，5min），酶標(biāo)儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算WB蛋白的濃度。兩種檢測(cè)方法筆者均有使用經(jīng)驗(yàn)，相比BCA法，Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時(shí)間，也無(wú)需配置反應(yīng)試劑，簡(jiǎn)單、快速、好用，筆者推薦Bradford法測(cè)定蛋白濃度。

嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，每次的蛋白濃度測(cè)定均需配制新鮮蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，保證每次測(cè)到的蛋白濃度的準(zhǔn)確性。然而，WB法評(píng)估蛋白表達(dá)水平本身就是一種半定量或者相對(duì)定量，因此在實(shí)際蛋白樣本準(zhǔn)本及濃度測(cè)定時(shí)只需保證均一性即可，即使用同樣的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算同一批蛋白的濃度，如果計(jì)算準(zhǔn)備即可保證蛋白上樣時(shí)內(nèi)參水平基本一致。因此，在實(shí)際操作中我們只需測(cè)定一次標(biāo)準(zhǔn)品的OD值、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可用此曲線來(lái)計(jì)算后續(xù)實(shí)驗(yàn)蛋白的濃度，節(jié)省時(shí)間和試劑。

具體的蛋白定量步驟，各位朋友參考試劑盒提供的方法即可，簡(jiǎn)單易行。至于標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，網(wǎng)絡(luò)亦可查到不是帖子介紹用不同軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。